第 十三章 验证

第二天，王静姝打算验证这套试剂盒的真假，昨晚上睡前她已经把实验设计好了，现在她在记录本上写下步骤，然后就开始实验。王静姝习惯在实验前把步骤先写一遍，边写边在脑海里预演接下来的实验，每一个实验都要做最好的准备，确保实验过程不出问题。

原本实验预期结果是对照组没有表达，而实验组根据药物浓度不同也许表达量会有变化，但是昨天的结果确是实验组和对照组的数据都差不多，对照标准曲线，各组的表达量还不低。她确定自己没有加错样品，也没有互相污染，但这样的结果让她不得不对自己的记忆产生怀疑。因此，这一次她干脆使用基因水平PCR验证过没有表达L因子的细胞C来做实验，这样无论如何也不会被污染。

实验前样品会用试剂盒自带稀释液稀释A，那么再取其他几种替代稀释液的试剂，PBS缓冲液、1640细胞培养基和其他合格ELISA试剂盒的稀释液B。

单纯稀释液不加样品组：A，PBS，1640，B；

稀释液加样品C上清液组：A+C，PBS+才，1640+C，B+C。

每组各设复孔。

设定好分组，接着就是按照步骤一步一步来了。

先是加入上上述分组的各溶液孵育2小时，洗涤后在加带标记抗体孵育2小时。第二次孵育时刚好可以吃午饭了。

期间，她又做了些别的实验。后来她打开电脑查看邮箱，之前构建的质粒，酶切正确的送去测序，结果应该回来了。

果然，一般来说酶切正确的质粒基本上就没问题了，但那只是间接证明DNA条带大小符合，而测序则是直接证明条带的每一个碱基都是否一致。

如此，她就该扩大带质粒的大肠杆菌培养，然后提取较多的质粒用以接下去的实验。之前保存了带质粒的大肠杆菌菌种，直接化冻，接种到液体LB培养基中，然后放在恒温摇床里培养。当然这一步现在做早了，晚上的时候再接种，然后在摇床培养过夜，第二天，提取质粒。

下午大约2点的时候，上午开始做的ELISA就可以上酶标仪检测了。王静姝又期待又忐忑的操作起酶标仪。

结果出来了，除了标准品组，用试剂盒自带稀释液的A组和A+C组都显色，且数值相近！而其他组都没有显色！

也就是说问题就出在稀释液了，稀释液里存在一种抗原能够跟包被抗体和标记抗体结合。她现在基本上推测这个试剂盒是假的了，里面的抗体和标准品（对应抗原）极有可能选用某种常见的便宜的抗原抗体。得出这样的结论还需要做一个实验。

必须用含有L因子的细胞上清液来验证。如果含有L因子的上清加稀释液A显色，不加则不显色，那么确定这套ELISA体系里的抗体绝对不是L因子的抗体。

不过目前她还没有确定L因子一定会分泌到细胞外，因此她虽然构建了过表达L的细胞系，但取其上清液如果没有显色，也不能够说明问题。

但还有另一个办法，她已经订购了一支L因子抗体兔-Anti-L，应该过几天就到了，到时候可以用该试剂盒的+标准品+Anti-L+标记抗兔二抗，若结果没有显色则说明标准品不是L因子。这个到时候在做了，现在的结果也足以说明问题，至少稀释液有问题是百分百肯定的，她必须整理一下实验数据，发给孙老师，看他怎么说。

孙书淮看到实验结果后，问她：“这试剂盒哪买的？”

王静姝递过试剂请购单，上面谢了试剂货号、名称、品牌、代理商、规格、购买量、价格等信息还有购买人王静姝的签名，小组长李河的签名以及孙书淮教授的签名。

“这家代理商以前我们在他们那买过试剂没有？”

“好像很少，也就是这两个月的事，他们的销售人员好像也是两个月前才来我们实验室推销。之前他们给了我们送了一点白介素6的试用装，好像是没有问题的。”王静姝递过一张名片，还有几张产品目录。

“他们的产品很齐全，而且价格比其他地方要优惠一些。其实主要还是之前他们送的白介素6试用装没有问题。”

“这真是害人不浅哪，你这一批细胞处理了多久了。”

“这一批细胞处理快两个月了，这个节点预测可能要开始表达了。”

“那不是这两个月都白做了。”

“倒也还好，我细胞每个星期处理一批新的，马上下周又可以检测了。只是现在要重新订购，还要等试剂，那我这些细胞只能先设计做别的实验了。不能浪费。”

“那影响也很大了。那你现在要赶紧再订一个试剂盒，找一家可靠的代理商购买，这个你去问姜琼，或者看能不能直接到官网上订购。”

“然后你联系他们销售员，把实验结果跟他们说，看他们怎么办。”孙书淮又补充了一句。

“让他们退钱并赔偿损失吗？”王静姝问道。

“你把他喊过来，到时候你和钱丹一起跟他谈。”

下午的时候，林君和亲自送晚饭来实验室。

“实验做了吗？”

“做了，看来被你说中了。”

“那你打算怎么办？”

“还能怎么办，订购新试剂呗。然后再找他们谈，看是退钱还是赔偿啥的。”

“没了？”

“嗯……到时候看他们态度怎么样吧，反正钱丹会跟他谈。”

做科研的人还是要有一颗大心脏，因为失败是家常便饭。虽然说往常实验也常有失败，但跟这次不一样，这次是试剂的锅，实验被这样搞砸了还是有点郁闷。

因此，这个时候，她说话都有点有气无力的样子。

林君和看着她的样子，心里很是心疼。

‘听说，今天晚上，月亮洲会放烟花。”

“放烟花？为什么，今天又不是什么节日？”

“这个我也不清楚，不过管那么多干嘛，有的看就好，不是吗？”

“那确实。我要在群里说一声，看有没有人一起去看。”

中心实验室聊天群。

王静姝：今天晚上，据说月亮洲放烟花，有没有人一起去看？

袁元圆：真的吗？咱俩一起去吧！

段青竹：@袁元圆，人家男朋友都来了，还会跟你去？[幸灾乐祸表情]

袁元圆：嘤嘤嘤，我被抛弃了

陶夭：哇，和男朋友一起看烟花，好浪漫啊[星星眼]，异地狗受到一万点伤害，嘤嘤嘤

王静姝：……